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    蛋白純化系統中親和純化常見問題及解決方法-上海金鵬

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    品牌:嘉鵬
    單價:面議
    發貨期限:自買家付款之日起 3 天內發貨
    有效期至:長期有效
    更新時間:2021-08-18 05:42
    所屬類別:儀器儀表 » 分析儀器
    信息版本:Mip版 手機版
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    詳細信息

    感謝使用上海金鵬蛋白純化系統Blupadstart進行蛋白純化分離實驗。
    1. 鎳柱使用中出現棕色是怎么回事?
    出現這樣的情況,主要是緩沖液中 DTT 的影響, DTT 會對鎳柱的顏色和純化效率有很大的影響,在堿性的緩沖液條件下鎳離子會被 DTT 還原生成
    棕色的沉淀,所以所有鎳柱的生產商都強調要盡量避免 DTT 的參與(一般的鎳柱耐受小于 5mM DTT,推薦緩沖液中不要超過2mM DTT)。
    2. 通過 His 標簽純化的蛋白,雜帶比較多,如何改進?
    (1)如果蛋白純化的是上清,蛋白酶會部分降解目的蛋白,可通過加多種蛋白酶控制劑改進。
    (2)可提高雜蛋白與鎳柱結合起始咪唑濃度,以降低雜蛋白與鎳柱的親和力。
    (3)雜蛋白和目的蛋白結合,可通過超聲前加入去垢劑的方式消除(1%-2%Tritonx-100)。
    3. 鎳柱堵了怎么辦?
    (1)柱子發生堵塞,可能是樣品中細胞碎片或其他雜顆粒所致,所以樣品一定要高速離心。
    (2)上清純化時,蛋白發生變性,有絮狀物產生,趕緊加入 1-2mM DTT (上清樣品處理要在冰浴中進行),還不行加尿素變性,使其在變形環境下。
    (3)樣品處理時的料液比不要太小,否則黏度大,或者導致蛋白析出或變性,料液比要在1/10-1/15 之間較適宜。
    4. 純化過程中,蛋白出現了渾濁,怎么辦?
    (1)出現渾濁,說明蛋白處在不穩定的環境中或者自身就不穩定,所以要檢查緩沖體系是否正確,環境是否低溫,或在緩沖液中加入還原劑 DTT。
    (2)加入肌氨酸鈉,迅速使蛋白變性,消除渾濁現象。

    ……

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